大家好，我wo是小一，我来为大家解答以上问wen题。培养基的配制与灭mie菌，培养基的配制很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！
培养基有很多种，你要配制哪na一种呢？
你要查cha清楚，你要配的培养基的成cheng分有那些，然后把要用yong的东西找到。在配制之前qian你要把装培养基的容器qi准备好，是用试管、平皿还是三角瓶。之后看要配的是固体培养基还是液ye体培养基，觉得是shi否放琼脂或明胶。之后找来一个ge大烧杯，依次把要放的物质zhi放入，要是配的是固体ti培养基要把加入琼脂或明胶的de培养基放在电炉上加热，待琼脂或明胶jiao完全溶解后趁热re迅速分装。之后把分装好的培养基封口kou，之后选择是干灭还是湿灭mie，等灭菌之后，配制zhi培养基的工作就完成了。
培养基的配制与灭菌
1目的
1.1了解并掌握培养yang基的配制、分装方法
1.2掌握各ge种实验室灭菌方法及技术shu。
2原理
培养基是供微wei生物生长、繁殖、代谢的混合he养料。由于微生物具ju有不同的营养类型，对营养物质zhi的要求也各不相同tong，加之实验和研究的目的不同，所以培pei养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但dan从营养角度分析，培养yang基中一般含有微生物所必bi需的碳源、氮源、无机盐yan、生长素以及水分fen等。另外，培养基还应具有适shi宜的pH值、一yi定的缓冲能力、一定的氧化还hai原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提ti取的胶体物质，是应用最广的de凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以yi下凝固。但多次ci反复融化，其凝固性xing降低。
任何一种培基一经制成就应ying及时彻底灭菌，以备纯chun培养用。一般培养基的灭菌采用yong高压蒸汽灭菌。
3材cai料
3.1器皿及材料
天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三san角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液ye管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸zhi、纱布、乳胶管、电dian炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂
蛋dan白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆dou汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶rong液。
4流程
称药品→溶解→调diaopH值→融化琼脂→过guo滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。
5步骤
5.1培pei养基的制备
5.1.1称量药品pin
根据培养基配方依次ci准确称取各种药品，放入适shi当大小的烧杯中，琼脂不bu要加入。蛋白胨极易yi吸潮，故称量时要迅速su。
5.1.2溶解
用量筒取一定量liang(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在zai放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻bo棒搅拌，以防液体溢出chu。待各种药品完全quan溶解后，停止加热，补足水分。如果配pei方中有淀粉，则先将淀粉用少shao量冷水调成糊状，并在火huo上加热搅拌，然后加足水分及其它原料liao，待完全溶化后，补足水shui分。
5.1.3调节pH
根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所suo需pH。测定pH可用pH试纸或huo酸度计等。
5.1.4溶化hua琼脂
固gu体或半固体培养基须加入一定量琼qiong脂。琼脂加入后，置电炉上一面mian搅拌一面加热，直至琼脂完全quan融化后才能停止搅拌，并补bu足水分(水需预热)。注意控kong制火力不要使培pei养基溢出或烧焦。
5.1.5过滤分装
先将过滤装置安装好（图tu3-1）。如果是液ye体培养基，玻璃漏lou斗中放一层滤纸，如果是固体或半固gu体培养基，则需在漏斗中zhong放多层纱布，或两层纱布夹一yi层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过guo滤后立即进行分装。分装时注意yi不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染。液ye体分装高度以试管高gao度的1/4左右为wei宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试shi管高度的1/3为宜；分装三角瓶ping，其装量以不超过三角jiao瓶容积的一半为宜。
5.1.6包bao扎标记
培养基分装后加好棉塞或试shi管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳sheng系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。
5.1.7灭菌
上述培养基ji应按培养基配方中规定的de条件及时进行灭mie菌。普通培养基为wei121℃20min，以保bao证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份fen。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体ti培养基，则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2)，斜面长chang度一般以不超过试shi管长度的1/2为宜；半固体培pei养基灭菌后，垂直冷凝成半固gu体深层琼脂。
5.1.8倒平板
将需倒平板的de培养基，于水浴锅中冷却到dao45～50℃,立li刻倒平板。
5.2灭菌方法
灭菌是指杀死或消灭一定环境中zhong的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭mie菌法两大类。本实验yan主要介绍物理方法的一种zhong，即加热灭菌。
加热灭菌包bao括湿热和干热灭菌两种。通过加热使shi菌体内蛋白质凝固变性，从而达到dao杀菌目的。蛋白质的凝固gu变性与其自身含水量有关，含水量liang越高，其凝固所需要的de温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌jun效力比干热大，因为wei在湿热情况下，菌体吸收shou水分，使蛋白质易yi于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。
5.2.1.高压蒸汽灭菌法fa
高压蒸汽灭mie菌用途广，效率高gao，是微生物学实验中zhong最常用的灭菌方法fa。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸zheng汽压力的升高而升高的原理设计ji的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水shui蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物wu品上的各种微生物wu和它们的孢子或芽孢。一般培养yang基、玻璃器皿以及传染性标本和工作zuo服等都可应用此法灭菌（图3-4）。
5.2.1.1操作方法和注意yi事项如下
加水shui
打开灭mie菌锅盖，向锅内加jia水到水位线。立式消毒锅guo最好用已煮开过的水，以便减少水垢gou在锅内的积存。注意水要加够，防止灭mie菌过程中干锅。
装料、加盖
灭菌材cai料放好后，关闭灭mie菌器盖，采用对角jiao式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密mi闭，勿使漏气。
排pai气
打开kai排气口(也叫放fang气阀)。用电炉加热，待dai水煮沸后，水蒸zheng气和空气一起从排pai气孔排出，当有大量蒸汽排出chu时，维持5min，使锅内冷空气完全quan排净。
升压、保压和降压
当锅内冷空气排pai净时，即可关闭bi排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制zhi电压以维持恒温，并开始计算灭mie菌时间，待时间达到要yao求（一般培养基和器qi皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压ya力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于yu瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成cheng瓶内液体冲出容器之外wai。
灭菌后的培养基ji空白培养
灭菌后hou的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培pei养无菌生长，可保存备用；斜面培养基ji取出后，立即摆成cheng斜面后空白培养；半固体的培pei养基垂直放置凝成半固体深层琼脂zhi后，空白培养。
5.2.2干热灭菌法
通tong过使用干热空气杀灭微生物的de方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌jun的物品包装就绪后，放入电烘箱xiang中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。
干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器qi具的灭菌。凡带有胶皮的de物品，液体及固体培养基ji等都不能用此法灭菌。
5.2.2.1灭菌前的准备
玻璃li器皿等在灭菌前必须经正确包bao裹和加塞，以保证玻bo璃器皿于灭菌后不被外wai界杂菌所污染。常chang用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在zai金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚hou纸，用棉绳以活结扎紧，以yi防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸xi管以拉直的曲别针一端放fang在棉花的中心，轻轻捅入管口kou，松紧必须适中，管口外露的de棉花纤维统一通过火焰烧shao去，灭菌时将吸管装入金属管筒tong内进行灭菌，也可用yong纸条斜着从吸管尖jian端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包bao好的吸管集中灭菌。
5.2.2.2干燥zao箱灭菌
将包bao扎好的物品放入ru干燥烘箱内，注意不要摆放太密mi，以免妨碍空气流通；不得de使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将jiang烘箱的温度升至zhi160～170℃并恒温1～2h，注zhu意勿使温度过高，超过170℃，器皿min外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如ru果是为了烤干玻bo璃器皿，温度为120℃持chi续30分钟即可。温度降至60～70℃时shi方可打开箱门，取出物品，否则ze玻璃器皿会因骤冷而爆裂。
用此法灭菌时，绝不能用yong油、蜡纸包扎物品。
5.2.2.3火焰灭菌jun
直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底di。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在zai酒精灯火焰上烧至红hong热进行灭菌。此外，在接jie种过程中，试管或三角瓶口kou，也采用通过火焰而达到dao灭菌的目的。
6结果
6.1记录各种不同物品所suo用的灭菌方法及灭菌条件（温度、压ya力等）。
6.2试述高压蒸汽灭菌的过程及注意事shi项。
7思考
7.1制备培pei养基的一般程序是什么？
7.2做过本次实验yan后，你认为在制备培养基ji时要注意些什么问题？
7.3灭菌在微生sheng物学实验操作中有何重zhong要意义？
4试述高压蒸汽灭菌的de操作方法和原理。
5高压蒸汽灭菌时应注zhu意哪些事项？
本文到此ci讲解完毕了，希望对大家jia有帮助。
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